ПРИКАЗ Министерства здравоохранения Челябинской области от 30.11.2006 № 457
"ОБ УТВЕРЖДЕНИИ КЛИНИКО-ОРГАНИЗАЦИОННОГО РУКОВОДСТВА ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ ОБЕСПЕЧЕНИЮ СИСТЕМЫ ИНФЕКЦИОННОГО КОНТРОЛЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО УЧРЕЖДЕНИЯ"
(вместе с "МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ОБЕСПЕЧЕНИЕМ СИСТЕМЫ ИНФЕКЦИОННОГО КОНТРОЛЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО УЧРЕЖДЕНИЯ")
Официальная публикация в СМИ:
публикаций не найдено
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ЧЕЛЯБИНСКОЙ ОБЛАСТИ
ПРИКАЗ
от 30 ноября 2006 г. № 457
Об утверждении клинико-организационного руководства
по микробиологическому обеспечению системы
инфекционного контроля лечебно-профилактического учреждения
На основании приказа Министерства здравоохранения Челябинской области от 12.10.2004 № 46 "Об утверждении Временного Порядка разработки, утверждения, внедрения и введения нормативных документов системы стандартизации в здравоохранении Челябинской области", в соответствии с приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 31 июля 2000 г. № 302 "О введение в действие отраслевого стандарта "Порядок разработки, согласования, принятия, внедрения и ведения нормативных документов системы стандартизации в здравоохранении", с целью повышения качества медицинского обслуживания населения Челябинской области
ПРИКАЗЫВАЮ:
1. Утвердить прилагаемое Клинико-организационное руководство "Микробиологическое обеспечение системы инфекционного контроля лечебно-профилактического учреждения".
2. Руководителям органов управления, государственных и муниципальных учреждений здравоохранения Челябинской области рекомендовать принять в качестве дополнительных рекомендаций для работы с федеральными и территориальными стандартами Клинико-организационное руководство "Микробиологическое обеспечение системы инфекционного контроля лечебно-профилактического учреждения", утвержденное п. 1 настоящего приказа.
3. Контроль за исполнением настоящего приказа возложить на первого заместителя Министра здравоохранения Челябинской области Москвичеву М.Г.
Министр здравоохранения
Челябинской области
В.А.ШЕПЕЛЕВ
Утверждено
приказом
Министерства здравоохранения
Челябинской области
от 30 ноября 2006 г. № 457
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ СИСТЕМЫ
ИНФЕКЦИОННОГО КОНТРОЛЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО УЧРЕЖДЕНИЯ
Клинико-организационное руководство
РАЗРАБОТЧИКИ:
Выгоняйлов Александр Витальевич, - ГМЛПУЗ "Челябинская
главный внештатный госпитальный областная клиническая
эпидемиолог Министерства здравоохранения больница", руководитель
Челябинской области, заместитель рабочей группы
главного врача ГМЛПУЗ "Челябинская
областная клиническая больница",
кандидат медицинских наук.
Брызгалова Ирина Викторовна, - ГОУ ВПО Росздрава
заместитель главного врача "Челябинская
государственная
медицинская академия"
Молчанова Ирина Витальевна, главный - ГМЛПУЗ "Челябинская
внештатный бактериолог Министерства областная клиническая
здравоохранения Челябинской области, больница"
заведующая бактериологической
лабораторией
ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ:
Клинико-организационное руководство "Микробиологическое обеспечение системы инфекционного контроля лечебно-профилактического учреждения" предназначено для применения в учреждениях здравоохранения Челябинской области.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОСНОВНЫЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Инфекционный контроль (ИК) - система эффективных организационных, профилактических и противоэпидемических мероприятий, направленных на предупреждение возникновения и распространения инфекционных заболеваний в стационаре, базирующихся на результатах эпидемиологической диагностики.
Госпитальные инфекции (ГИ) - любые инфекционные заболевания (состояния), проявившиеся или возникшие в условиях стационара. Понятие ГИ включает в себя заносы инфекции и внутрибольничные инфекции.
ГСИ - гнойно-септическая инфекция.
Заносы инфекции - это инфекционные заболевания, с местом заражения вне лечебно-профилактического учреждения, но проявившиеся при поступлении в стационар, либо во время пребывания в стационаре.
Внутрибольничные (нозокомиальные) инфекции (ВБИ) - это инфекционные заболевания (состояния), возникшие в данном лечебном учреждении и не имевшиеся до поступления в стационар даже в инкубационном периоде, проявившиеся в условиях стационара или после выписки пациента в течении инкубационного периода. Либо связанные с проведением медицинских манипуляций в амбулаторно-поликлинических условиях.
Примечание: инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами, могут считаться внутрибольничными в пределах 30 дней после выписки из стационара, если установлен факт внутрибольничного заражения. К внутрибольничным инфекциям относятся также случаи инфицирования работников лечебно-профилактических учреждений, возникшие в результате их профессиональной деятельности.
Эпидемиологический надзор (ЭН) - динамическая оценка состояний и тенденций развития эпидемического процесса и своевременное вмешательство в его ход с целью достижения конечного результата - профилактики и снижения инфекционной заболеваемости.
Микробиологическое обеспечение инфекционного контроля (МН) - слежение за микробиологическим пейзажем культур, выделяемых от больных с учетом антибиотикорезистентности, чувствительности к дезинфектантам и возможной смене возбудителей по видовому и типовому признакам.
ЛПУ - лечебно-профилактическое учреждение
КИК - комитет инфекционного контроля лечебно-профилактического учреждения.
Микробиологическое обеспечение инфекционного контроля
Система эпидемиологического надзора за внутрибольничными инфекциями, помимо учета и регистрации внутрибольничных инфекций, включает в себя:
- расшифровку этиологической структуры ВБИ;
- санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды в ЛПУ;
- изучение циркуляции патогенных и условно-патогенных микроорганизмов;
- определение широты распространения и спектра устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, антисептикам, дезинфектантам.
1. Расшифровка этиологии внутрибольничных инфекций имеет важное значение для выбора рациональных методов лечения, оценки эпидемической ситуации в стационаре и организации целенаправленных противоэпидемических мероприятий.
Для расшифровки этиологии внутрибольничного заболевания проводится:
- Микробиологическое обследование патологического материала от больного с использованием методов количественного учета микроорганизмов в исследуемом материале;
- Идентификация выделенных микроорганизмов и внутривидовая дифференциация;
- Определение спектра чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам;
- В отдельных случаях определение специфических антител в динамике в сыворотке заболевшего.
Этиологическая роль условно-патогенного микроорганизма при внутрибольничном заболевании может быть основана на следующих признаках: выделение данного микроорганизма из патологического материала в монокультуре или его доминирование в микробных ассоциациях, массивность выделения, обнаружение данного микроорганизма при повторных исследованиях, наличие специфических иммунологических сдвигов в организме больного.
Микробиологическое обеспечение системы инфекционного контроля в ЛПУ включает:
- Разработку перечня показаний для микробиологического обследования;
- Стандартизацию техники забора образцов материала и транспортировки их в микробиологическую лабораторию;
- Стандартизацию тестирования микроорганизмов на чувствительность к антибиотикам, внедрение в деятельность лаборатории системы внутреннего контроля качества;
- Внедрение компьютерной аналитической программы WHONET;
- Внедрение в работу микробиологической лаборатории методики определения чувствительности микрофлоры к антисептикам и дезинфектантам;
- Проведение дополнительного обучения сотрудников учреждения методикам забора, хранения, транспортировки проб для бактериологических исследований.
Внедрение данных мероприятий в сочетании с совершенствованием системы эпидемиологической диагностики (эффективный оперативный и ретроспективный эпидемиологический анализ) позволяет организовать слежение за формированием госпитальных штаммов микроорганизмов.
С целью соблюдения в ЛПУ единой рациональной тактики и стратегии организации антиботикопрофилактики и антибиотикотерапии, а также создания единой системы микробиологической диагностики внутрибольничных инфекций необходимо разработать и внедрить систему микробиологического мониторинга, соответствующую международным стандартам.
В учреждении должен быть принят приказ "О введении стандартов микробиологических исследований" во всех отделениях. Приказом также регламентируется введение стандартной формы направления на микробиологическое исследование.
Предлагаются следующие варианты:
Регламент микробиологического исследования беременных, рожениц и родильниц
В целях улучшения качества организации микробиологического мониторинга за микробиологическим пейзажем и уровнем антибиотикорезистентности циркулирующих микроорганизмов среди пациентов акушерского отделения, является целесообразным ввести следующую конкретную схему бактериологического обследования. Примером создания такой схемы может служить ниже следующий вариант:
Показания
для проведения бактериологического обследования
без дополнительных клинических обоснований:
Регламент микробиологического исследования новорожденных
В целях улучшения качества организации микробиологического мониторинга за пейзажем микрофлоры и уровнем антибиотикорезистентности циркулирующих микроорганизмов среди новорожденных, является целесообразным вести следующую схему бактериологического обследования:
Показания
для проведения бактериологического обследования
без дополнительных обосновании:
Микробиологическое исследование ОПБ
- Бактериологический посев из цервикального канала на флору и чувствительность к антибиотикам проводится по показаниям:
- необследованные женщины
- женщины с рецидивирующим кольпитом.
- Бактериологический посев мочи на флору и чувствительность к антибиотикам проводится по показаниям:
- острый пиелонефрит
- бактериурия
- пиурия
Микробиологическое исследование роженицы, родильницы
- Гистологическое исследование плаценты проводится только при подозрении на генерализованную инфекцию для определения путей инфицирования (нисходящая, восходящая инфекция).
- У необследованных ранее рожениц, при наличии кольпита - материал для исследования - отделяемое из цервикального канала.
- У новорожденных: материал для исследования - кожа за ушной складкой, подмышечная впадина, наружный слуховой проход, кулачок, микроскопия желудочного содержимого.
Микробиологическое исследование для новорожденного ПИТ
- Забор материала из интубационной трубки через 1 сутки; содержимое трахеи тоже через 1 сутки;
- По эпидемиологическим показаниям (бактериологический посев кала, материал из очагов инфекции при диагнозе ВУИ);
- Забор материала для бактериологического исследования проводится до начала лечения антибиотиками!
Примерный план-схема микробиологического мониторинга
в отделениях многопрофильного стационара
Отделение реанимации и интенсивной терапии
При поступлении больного
- Мокрота (при наличии интубации)
- Моча (при наличии катетера мочевого пузыря)
Далее
- 1 раз в 7 дней в течение всего времени нахождения в ОРиИТ
- При удалении мочевого катетера, экстубации последний забор материала производится после указанных манипуляций
В случае развития ГСИ
Исследования проводятся до начала АБ терапии в сочетании с бактериологическим посевом крови на стерильность № 3 и далее по клиническим показаниям
При подозрении на острую кишечную инфекцию (ОКИ)
При каждом акте дефекации - бактериологический посев кала № 3
При инфекции мочевыводящих путей (ИМП)
Бактериологический посев мочи № 3 + кровь на стерильность № 3 в течение суток до начала антимикробной терапии и далее при смене антимикробной терапии по клиническим показаниям
Отделение урологии
Исследование мочи проводится
- При поступлении больного в 1-е сутки
- При изменениях в общеклинических анализах мочи после проведенной катетеризации
- Через 48 ч после проведенной операции, инструментальных исследований органов мочевыводящей системы, после удаления мочевого катетера
Хирургические отделения
- Инфекции суставов и костей, межпозвонкового дискового пространства - костная ткань, пунктат при каждой пункции, образцы инфицированных тканей
- Инфекции ЦНС - образцы инфицированных тканей, пунктаты абсцессов, СМЖ при каждом заборе, кровь на стерильность (гемокультуру) № 3 в течение суток
- Инфекция глаз - экссудат (соскоб) с конъюнктивы, роговицы, слезных желез, содержимое передней или задней камеры, жидкость стекловидного тела
- Инфекция ЛОР органов - отделяемое слуховых проходов, жидкость из среднего (внутреннего) уха при хирургическом вмешательстве
- Инфекции полости рта - отделяемое из гнойного очага
- Инфекции женской половой системы - кровь на стерильность № 3, гнойное отделяемое из матки, ткань эндометрия, образцы тканей (жидкостей), полученные во время биопсии, пункции, хирургического вмешательства
- Инфекции пролежня - при наличии отделяемого проводится бак. исследование
- Инфекции кровотока - кровь на стерильность не менее 3 раз в течение суток, часть в/в катетера при его наличии и далее по клиническим показаниям или перед сменой АБ терапии
- Эндокардит - см. инфекции кровотока + часть клапана (интраоперационно)
- Миокардит, перикардит - перикардиальная жидкость (интраоперационно) + см. инфекции кровотока
- При поступлении в случае наличия гнойного процесса - отделяемое раны в сочетании с исследованием крови на стерильность
- При развитии инфекции хирургического разреза - отделяемое ран, аспират инфицированных полостей, в том числе полученных интраоперационно и далее 1 раз в 7 дней при наличии отделяемого + кровь на стерильность № 3 в течение суток
- Инфекции дыхательной путей - мокрота, смывы с бронхов при использовании защищенной методики забора + кровь на стерильность № 3 и далее по клиническим показаниям при смене антимикробной терапии
Отделения гематологии и эндокринологии
- Бак. посев мочи - изменениях в общеклиническом анализе мочи и наличии лихорадки
- Бак. посев мокроты - при подозрении на инфекцию дыхательных путей
- Кровь на стерильность № 3 (и на грибы) в течение суток и далее по клиническим показаниям - при лихорадке свыше 3-х суток, инфекции мочевыводящих путей, инфекциях дыхательной системы
Отделение пульмонологии
- Мокрота до начала АБ терапии и далее по клиническим показаниям при смене антимикробной терапии
- Промывные воды бронхов при заборе защищенными методами
- Кровь на стерильность при инфекциях дыхательной системы № 3 в течение суток и далее по клиническим показаниям
Отделение нефрологии
- Моча № 2 и далее по клиническим показаниям (сохраняющаяся лихорадка и изменения общеклинических анализов мочи) при смене антимикробной терапии
- Кровь на стерильность № 3 в течение суток до начала антимикробной терапии при инфекции мочевыводящих путей
Традиционные инфекции
- Общий анализ крови обязательно
- Бактериологический посев кала с каждого акта дефекации при подозрении на ОКИ
- Лихорадка неясного генеза:
1) кровь на стерильность и гемокультуру № 3 в течение суток до начала антимикробной терапии
2) бактериологический посев мочи
3) остальные исследования после консультации врача-инфекциониста по его назначению
2. Санитарно-бактериологические исследования объектов
окружающей среды в лечебно-профилактических учреждениях
При оценке санитарно-эпидемиологического состояния лечебного учреждения, а также выявление путей и факторов передачи возбудителей внутрибольничных инфекций важную роль играют данные санитарно-бактериологических исследований объектов окружающей среды.
Плановые исследования проводятся в соответствие с СП 1.1.1058-01 "Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-эпидемиологических мероприятий" (приложение № 1).
Для выделения бактериальной обсемененности объектов окружающей среды обследуют эпидемиологически значимые объекты (жидкие лекарственные формы, грудное молоко, предметы ухода за больными, руки персонала, дыхательную аппаратуру).
В смывах с объектов окружающей среды определяют стафилококки синегнойную и кишечную палочки, клебсиеллы, протей, энтеробактер, при необходимости и другие виды микроорганизмов.
Обнаружение указанных видов микроорганизмов свидетельствуют о некачественно проводимых дезинфекционных мероприятиях и требует усиления комплекса санитарно-гигиенических мероприятий.
Особое внимание уделяют контролю за стерильностью хирургического инструментария, игл, шприцев, шовного материала, катетеров, аппаратов для искусственного кровообращения, эндоскопической аппаратуры и др.
Исследование окружающей среды
- Проводится необоснованно широко и часто неправильно
- В настоящее время не рекомендуется проводить рутинное культуральное исследование воздуха или материала, взятого с окружающих предметов и поверхностей
- Данную процедуру следует проводить только по эпидемиологическим показаниям (и для образовательных или научных целей)
- Необходимо помнить, что исследование материала из окружающей среды является дорогостоящей процедурой
Ориентировочный перечень объектов, подлежащих
бактериологическому контролю
Оперблок
- маска наркозного аппарата
- тройник наркозного аппарата
- гофрированная трубка
- рабочий стол анестезиологов
- операционный стол
- шланг вакуумнасоса
- смывы с рук операционной бригады
Ориентировочный перечень объектов, подлежащих
бактериологическому контролю
Послеоперационные палаты, ОРиИТ
- перчатки после дезинфекции (чистые перчатки)
- кислородная маска (устройство увлажнения кислорода)
- кровать, подготовленная для больного
- полотенце для рук персонала (при использовании разовых салфеток не производится)
- шланг вакуумотсоса
- полка шкафа для хранения медикаментов или внутренняя поверхность холодильника для хранения лекарств
- ручка крана (при использовании одноразовых салфеток не производится)
- смывы с рук после гигиенической антисептики
- рабочий стол мед. персонала
- ручки дозаторов
Ориентировочный перечень объектов,
подлежащих бактериологическому контролю
Перевязочная
- кушетка для перевязок
- полотенце для рук персонала (при использовании разовых салфеток не производится)
- халат медсестер
- руки врачей, медсестер после гигиенической антисептики
- рабочий медицинский стол
- внутренняя поверхность холодильника или шкафа для хранения медикаментов
- ручка крана (при использовании одноразовых салфеток не производится)
- ручка дозатора
----T--------------------T---------T-------------T---------T------------¬
¦ № ¦ Отделения ¦Кратность¦ Количество ¦ Смывы и ¦ Количество ¦
¦ ¦ ¦ ¦ проб ¦ воздух ¦ проб ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 1 ¦ОРИТ, ¦1 раз в¦10 проб на ¦1 раз в 3¦4 пробы на ¦
¦ ¦послеоперационные ¦месяц ¦отделение ¦мес. ¦1 палату ¦
¦ ¦палаты хирургических¦ ¦ ¦ ¦ ¦
¦ ¦отделений ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 2 ¦Хирургическое ¦1 раз в¦10 проб на ¦1 раз в 3¦15 проб ¦
¦ ¦отделение ¦месяц ¦отделение ¦мес. ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 3 ¦Терапевтическое ¦1 раз в 3¦4 пробы на ¦1 раз в 6¦10 проб ¦
¦ ¦отделение ¦мес. ¦отделение ¦мес ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 4 ¦Поликлиника ¦1 раз в¦4 пробы на ¦1 раз в 3¦4 пробы на ¦
¦ ¦(хирургический ¦месяц ¦кабинет ¦мес. ¦кабинет ¦
¦ ¦кабинет) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 5 ¦Поликлиника ¦1 раз в 6¦3 пробы на ¦1 раз в 6¦4 пробы на ¦
¦ ¦(процедурный ¦мес. ¦кабинет ¦мес. ¦кабинет ¦
¦ ¦кабинет) ¦ ¦ ¦ ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 6 ¦Оперблок ¦1 раз в¦6 проб на ¦1 раз в 3¦4 пробы на ¦
¦ ¦ ¦месяц ¦операционную ¦мес. ¦одну ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦операционную¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 7 ¦Эндоскопия - ¦1 раз в 3¦3 пробы на ¦1 раз в 6¦4 пробы на ¦
¦ ¦кабинеты ¦мес. ¦кабинет ¦мес. ¦кабинет, в ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦том числе ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦после ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦дезинфекции ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦высокого ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦ ¦уровня (ДВУ)¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 8 ¦Лаборатория ¦1 раз в 3¦3 пробы ¦1 раз в 6¦до 10 проб ¦
¦ ¦ ¦мес. ¦ ¦мес ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦ 9 ¦Физиотерапевтическое¦1 раз в 6¦5 проб ¦1 раз в ¦до 10 проб ¦
¦ ¦отделение ¦мес. ¦ ¦год ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦10.¦Прачечная ¦ - ¦ - ¦1 раз в 6¦5 проб ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦мес. ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦11 ¦Аптека ¦1 раз в 3¦5 проб ¦1 раз в 6¦10 проб ¦
¦ ¦ ¦мес. ¦готовых ¦мес. ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦лекарственных¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦форм + 3 ¦ ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦пробы ¦ ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦12 ¦Пищеблок ¦ - ¦ - ¦1 раз в ¦10 проб ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦год ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦(летний ¦ ¦
¦ ¦ ¦ ¦ ¦период) ¦ ¦
+---+--------------------+---------+-------------+---------+------------+
¦13 ¦Контроль качества ¦1 раз в 6 мес. согласно инструкции ¦
¦ ¦работы стерилизующей¦ ¦
¦ ¦аппаратуры (паровые,¦ ¦
¦ ¦вакуумные ¦ ¦
¦ ¦стерилизаторы) ¦ ¦
L---+--------------------+-----------------------------------------------
Перечень материалов для взятия на стерильность
- Роторасширитель, ларингоскоп
- Руки хирурга, медсестер после хирургической антисептики
- Операционное поле
- Белье хирургическое (постельное белье в асептическом блоке, отделении новорожденных, операционных)
- Перевязочный материал
- Шовный материал (при использовании материала, подвергшегося стерилизации в заводских условиях, забор не производится)
- Иглы, шприцы (при стерилизации в больничных условиях)
- Катетеры, резиновые перчатки и другие изделия из резины
- Изделия медицинского назначения (по 1-му предмету):
1) стерилизация в паровом стерилизаторе
2) стерилизация в вакуумном стерилизаторе
3) стерилизация химическим методом (ларингоскопы и т.д.)
Примечание
- Обязательно уточнять средство, использующееся в качестве антисептика
- При заборе смывов с внешней среды указывать:
1) дату генеральной уборки
2) концентрацию
3) наименование препарата, использованного для генеральной уборки, текущей дезинфекции помещения
Объем и частота обследований
объектов внешней среды и забора материала на стерильность
Примечание:
1. Ответственность за соблюдение объема и периодичности исследований несет заведующая бактериологической лабораторией.
2. Исследования проводятся по графику, составляемому ежеквартально старшей медсестрой бактериологической лаборатории и утвержденному заместителем главного врача по эпидемиологическим вопросам (госпитальным эпидемиологом)
3. Сведения о результатах исследований ежемесячно передаются в эпидемиологический отдел ЛПУ старшей медсестрой бактериологической лаборатории, при неудовлетворительных результатах (немедленно) врачом, ответственным за проведение санитарно-показательных исследований.
4. Исследования по п. 13 проводятся с использованием биологических тестов при наличии специально выделенного термостата (+55 град. С), при отсутствии таких возможностей - по договору с ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Челябинской области", заключаемому ежегодно.
Микробиологический мониторинг очищенной воды
1. Забор проб воды должен производиться в месте подключения аппарата для гемодиализа к системе.
2. Забор проб диализата должен производиться в месте его выхода из диализатора.
3. Общее количество живых бактерий в воде, предназначенной для приготовления диализата, не должно превышать 50 КОЕ/мл.
4. Общее количество живых бактерий в диализате не должно превышать 200 КОЕ/мл.
3. Изучение циркуляции патогенных
и условно патогенных микроорганизмов
Динамическое слежение за циркуляцией патогенных и условно-патогенных возбудителей в стационаре является основой для выявления потенциально опасных эпидемиологических ситуаций и предупреждения возникновения вспышек внутрибольничных заболеваний.
Данные о циркуляции в стационаре патогенных и условно-патогенных микроорганизмов могут быть получены на основании анализа и обобщения результатов микробиологических исследований, проводимых по поводу:
- расшифровки этиологической структуры внутрибольничных заболеваний и слежению за динамикой ее изменений;
- определение условно-патогенных возбудителей в воздухе, на объектах окружающей среды;
- определения широты распространения, уровня и массивности носительства медперсоналом и больными возбудителей внутрибольничных инфекций.
4. Определение спектра устойчивости микроорганизмов
к антибиотикам, дезинфектантам, антисептикам
При длительном применении антибиотиков и химиопрепаратов наблюдается формирование устойчивых к ним микроорганизмов, это ограничивает терапевтическую эффективность химиопрепаратов, способствует возникновению внутрибольничных заболеваний, вызываемых устойчивыми штаммами микроорганизмов.
Слежение за лекарственной устойчивостью микроорганизмов в лечебном учреждении включает:
- определение устойчивости микроорганизмов, выделенных от больных и являющихся этиологическим фактором заболеваний, к широко применяемым в лечебном учреждении антибиотикам (антисептикам);
- определение лекарственной устойчивости микроорганизмов, выделенных от длительных носителей (какого-либо патогенного микроорганизма) из числа медицинского персонала и больных;
- определение устойчивости к дезинфектантам микроорганизмов, возбудителей гнойно-септических инфекций (выборочно);
- обобщение и анализ информации об основных видах и лекарственной устойчивости внутрибольничных штаммов микроорганизмов с целью определения рациональной тактики применения антибиотиков и др. химиопрепаратов.
НАБОРЫ ДИСКОВ С АНТИБИОТИКАМИ
ДЛЯ РАЗЛИЧНЫХ ВИДОВ МИКРООРГАНИЗМОВ
Стрептококк (пневмококк, бета-гемол.)
Оксациллин 1 мкг; Эритромицин; Левофлоксацин; Левомицетин; Рифампицин; Линкомицин
Пневмококк - добавить триметоприм-сульфаметаксазол
Энтерококк - Ампициллин; Амоксиклав; Ванкомицин; Гентамицин 120 мкг;
Доксициклин; Левомицетин
Стафилококк I.
Амоксиклав; Оксациллин 1 мкг; Эритромицин; Ципрофлоксацин; Гентамицин; Линкомицин; Пенициллин
Стафилококк II (при устойчивости к набору I)
Рифампицин; Фузидин; Ванкомицин; Левофлоксацин;
Сульфометаксазол с триметопримом 23,75/1,25; Линезолид (по требованию)
Стафилококк из мочи
Оксациллин; Амоксиклав; Норфлоксацин; Фурадонин; Гентамицин; Пенициллин
Грам (-) I.
Амоксиклав; Цефазолин, Цефтриаксон; Цефтазидим; Ципрофлоксацин; Гентамицин
Амикацин
Грам (-) II (при устойчивости к набору I)
Имипенем; Меропенем; Цефепим
Грам (-) из мочи
Амоксиклав; Фурадонин; Цефазолин; Цефотаксим; Цефуроксим; Норфлоксацин; Гентамицин
Грам (-) на ОКИ
Ампициллин; Доксициклин; Левомицетин; Ципрофлоксацин; Цефтриаксон
Синегнойный I.
Гентамицин; Амикацин; Цефтазидим; Цефоперазон; Ципрофлоксацин; Имипенем
Полимиксин (имеет диагностическое значение)
Синегнойный II (при устойчивости к набору I)
Цефепим; Меропенем
(Stenotrophomonas maltophilia - только сульфометаксазол с триметопримом
Ацинетобактер
Амикацин; Цефоперазон; Цефепим; Меропенем; Имипенем;
Ампициллин-сульбактам
5. Эпидемиологический надзор
за резистентностью к антимикробным препаратам
Эпидемиологический надзор за антимикробной резистентностью представляет собой систематический постоянный процесс сбора и анализа данных для количественной оценки распространенности антибитиотико-резистентности и ее временной динамики.
Целью проведения эпидемиологического надзора за антимикробной резистентностью является получение информации, необходимой для разработки и внедрения более эффективных подходов к лечению инфекций, сдерживанию появления и распространения антимикробной резистентности на локальном, региональном, национальном и международном уровнях. Рекомендации по организации наблюдения за антибиотикорезистентностью разработаны ВОЗ и Исследовательской группой Европейского общества микробиологии и инфекционных болезней.
Для получения достоверной информации в процессе эпидемиологического надзора за антибиотикорезистентностью получаемые данные о чувствительности выделенного штамма микроорганизма должны быть взаимосвязаны с определенным случаем заболевания у пациента (демографические данные, вид инфекции, наличие факторов риска, результат лечения и пр.).
Минимальный рекомендуемый набор данных для проведения эпидемиологического надзора за антибиотикорезистентностью должен включать:
- уникальный идентификационный код пациента (например, инициалы, номер истории болезни, страхового полиса и т.п.);
- дату рождения пациента;
- пол пациента;
- место жительства;
- тип медицинского учреждения;
- название отделения, клиники и пр.;
- тип отделения стационара (напр., терапевтическое, хирургическое и пр.);
- дату поступления пациента;
- основные симптомы или особенности клинической картины заболевания;
- инфекционное заболевание, выявленное у пациента;
- дату возникновения симптомов инфекции или установления диагноза;
- характер инфекции (внебольничная или нозокомальная);
- вид клинического материала;
- дату и время забора материала;
- данные о предшествующей антибиотикотерапии;
- данные об антимикробной терапии, проводимой в настоящее время;
- сведений об исходе заболевания.
На практике проведение эпидемиологического надзора за антибиотикорезистентностью обычно подразумевает использование микробиологических данных, получаемых на регулярной основе в рутинной практике, использование дополнительных сведений о пациенте, которые возможно собрать, с их последующей обработкой, анализом и представлением результатов анализа.
6. Мероприятия по обеспечению качества работы оборудования
------------------T---------------------------------------T------------------¬
¦ Тип аппарата, ¦ Рутинное обслуживание ¦ Техническое ¦
¦ прибора, +-----------------------T---------------+ обслуживание, ¦
¦ оборудования ¦ Мероприятия ¦ Периодичность ¦ периодичность ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦ 1 ¦ 2 ¦ 3 ¦ 4 ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Стерилизатор ¦Удаляют все предметы, ¦После каждого ¦ 1 раз в год ¦
¦паровой ¦которые могут оказаться¦цикла ¦ ¦
¦(автоклав) ¦камере. ¦ ¦ ¦
¦ ¦Очищают автоклав, ¦ ¦ ¦
¦ ¦используя не ¦ ¦ ¦
¦ ¦хлорированные моющие ¦ ¦ ¦
¦ ¦средства ¦ ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Стерилизатор ¦Санитарная обработка ¦По показаниям ¦ 1 раз в год ¦
¦воздушный (шкаф ¦шкафа протиранием ¦ ¦ ¦
¦сушил.-стерилиз.)¦наружных поверхностей ¦ ¦ ¦
¦ ¦дезинфицирующим ¦ ¦ ¦
¦ ¦раствором ¦ ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Термостат ¦Очистка и дезинфекция ¦1 раз в месяц ¦ 1 раз в год ¦
¦ ¦внутренних поверхностей¦ ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Холодильник ¦Мойка и дезинфекция ¦Совмещается с ¦После окончания ¦
¦ ¦ ¦оттаиванием ¦среднего срока ¦
¦ ¦ ¦холодильника, ¦эксплуатации не ¦
¦ ¦ ¦предусмотренное¦реже 1 раза в 3 ¦
¦ ¦ ¦правилами ¦года ¦
¦ ¦ ¦эксплуатации ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Дозаторы ¦Проверяют наличие на ¦Перед началом ¦ 1 раз в год ¦
¦ ¦открытых поверхностях ¦работы каждые 3¦ ¦
¦ ¦пыли и грязи, следят за¦месяца ¦ ¦
¦ ¦чистотой конуса. При ¦ ¦ ¦
¦ ¦необходимости протирают¦ ¦ ¦
¦ ¦70 град. этиловым ¦ ¦ ¦
¦ ¦спиртом. При условии ¦ ¦ ¦
¦ ¦ежедневного ¦ ¦ ¦
¦ ¦использования пипетки ¦ ¦ ¦
¦ ¦необходимо проводить ¦ ¦ ¦
¦ ¦профилактические ¦ ¦ ¦
¦ ¦поверки ¦ ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Водяная баня ¦Моют внутренние стенки,¦1 раз в месяц ¦ 1 раз в год ¦
¦ ¦дезинфицируют и меняют ¦ ¦ ¦
¦ ¦воду ¦ ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Центрифуга ¦Очистить и ¦После каждого ¦ 1 раз в год ¦
¦ ¦дезинфицировать ¦использования ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Ламинарный бокс ¦0,5 % р-р "Пероксимед" ¦1 раз в неделю ¦ 1 раз в год ¦
¦ ¦или 3 % р-р H2O2 + 0,5 ¦--> проверяют ¦ ¦
¦ ¦% р-р моющего средства ¦обсемененность ¦ ¦
¦ ¦ ¦воздуха - 2 ¦ ¦
¦ ¦ ¦чашки с МПА на ¦ ¦
¦ ¦ ¦15 мин. --> 37 ¦ ¦
¦ ¦ ¦град. C на 48 ¦ ¦
¦ ¦ ¦ч. ¦ ¦
+-----------------+-----------------------+---------------+------------------+
¦Микроскоп ¦- чистка поверхности ¦Ежедневно после¦- Профилактическая¦
¦ ¦линз (иммерсионного ¦завершения ¦чистка и смазка ¦
¦ ¦объектива, конденсора) ¦рабочего дня ¦микроскопа 2 раза ¦
¦ ¦- механические части ¦Еженедельно в ¦в год ¦
¦ ¦протирают мягко ¦нерабочее время¦- Проверка и ¦
¦ ¦салфеткой и ¦Постоянно в ¦регулировка ¦
¦ ¦периодически смазывают ¦нерабочее время¦конденсора 1 раз в¦
¦ ¦бескислотным вазелином;¦ ¦ год ¦
¦ ¦- микроскоп следует ¦ ¦ ¦
¦ ¦накрывать чехлом для ¦ ¦ ¦
¦ ¦предохранения от пыли ¦ ¦ ¦
L-----------------+-----------------------+---------------+-------------------
Сведения
по поверке и аттестации оборудования при проведении
микробиологических исследований в КДЛ ЛПУ
----------------------------T----------------------------------T----------------¬
¦ Тип аппарата, прибора ¦ Поверка средства измерения (СИ) ¦ Аттестация ¦
¦ +--------------------T-------------+вспомогательного¦
¦ ¦ Виды измерений ¦Периодичность¦ оборудования. ¦
¦ ¦ ¦ ¦ Периодичность ¦
¦ ¦ ¦ ¦ аттестации. ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Термометр ¦ ¦1 раз в 5 лет¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Весы, разновесы ¦СИ массы ¦1 раз в год ¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Манометры эл. технические и¦СИ давления и ¦1 раз в год ¦ ¦
¦эл. контактные ¦расхода ¦ ¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Дозаторы объема ¦СИ давления и ¦1 раз в год ¦ ¦
¦Дозаторы автоматические ¦расхода ¦ ¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Мерная лабораторная посуда ¦Поверке не подлежит ¦ ¦ ¦
¦2-го класса точности ¦ ¦ ¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Водяная баня ¦ ¦1 раз в 5 лет¦ ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Центрифуга ¦ ¦ ¦Проводится ¦
¦ ¦ ¦ ¦согласно ¦
¦ ¦ ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦ ¦ ¦ ¦данным в ¦
¦ ¦ ¦ ¦эксплуатационной¦
¦ ¦ ¦ ¦документации и ¦
¦ ¦ ¦ ¦паспорте ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Стерилизатор паровой ¦СИ давления и ¦1 раз в год ¦Проводится ¦
¦(автоклав), ВСИ ¦расхода ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦ ¦Термометр ¦1 раз в 5 лет¦данным в ¦
¦ ¦ ¦ ¦эксплуатационной¦
¦ ¦ ¦ ¦документации, ¦
¦ ¦ ¦ ¦или ¦
¦ ¦ ¦ ¦устанавливается ¦
¦ ¦ ¦ ¦ОМУ 42-21-35-91 ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Стерилизатор воздушный ¦ ¦1 раз в 5 лет¦Проводится ¦
¦(шкаф ¦ ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦сушильно-стерилизационный),¦ ¦ ¦данным в ¦
¦ВСИ ¦ ¦ ¦эксплуатационной¦
¦ ¦ ¦ ¦документации и ¦
¦ ¦ ¦ ¦паспорте ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Термостат, ВСИ ¦Поверке не подлежит ¦Термометр - 1¦Проводится ¦
¦ ¦Допустимое ¦раз в 5 лет ¦рекомендациям, ¦
¦ ¦отклонение +-0,5 ¦ ¦данным в ¦
¦ ¦град. C; учет ¦ ¦паспорте и ¦
¦ ¦ежедневно с отметкой¦ ¦руководстве по ¦
¦ ¦в журнале ¦ ¦эксплуатации или¦
¦ ¦ ¦ ¦1 раз в 2 года с¦
¦ ¦ ¦ ¦клеймом ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Анализатор для ИФА, ВСИ ¦Оптическая плотность¦ ¦1 раз в год ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Бактериологический ¦Поверке не подлежит ¦ ¦Проводится ¦
¦анализатор для ¦Используются ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦идентификации и определения¦эталонные штаммы ¦ ¦данным в ¦
¦чувствительности ¦АТСС, указанные ¦ ¦паспорте и ¦
¦микроорганизмов (имп. ¦фирмой-изготовителем¦ ¦руководстве по ¦
¦прибор), ВСИ ¦инструкции ¦ ¦эксплуатации ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦Аппарат для гемокультур ¦ ¦ ¦Проводится ¦
¦(импортный прибор), ВСИ ¦ ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦ ¦ ¦ ¦данным в ¦
¦ ¦ ¦ ¦паспорте и ¦
¦ ¦ ¦ ¦руководстве по ¦
¦ ¦ ¦ ¦эксплуатации ¦
+---------------------------+--------------------+-------------+----------------+
¦СО2 - инкубатор (имп. ¦ ¦ ¦Проводится ¦
¦прибор), ВСИ ¦ ¦ ¦рекомендациям, ¦
¦ ¦ ¦ ¦данным в ¦
¦ ¦ ¦ ¦паспорте и ¦
¦ ¦ ¦ ¦руководстве по ¦
¦ ¦ ¦ ¦эксплуатации ¦
L---------------------------+--------------------+-------------+-----------------
Внутрилабораторный контроль
за качеством работы оборудования, проводимый
в микробиологических лабораториях ЛПУ
При определении чувствительности микроорганизмов к АБП любым методом необходимо выполнить процедуры внутреннего контроля качества исследования.
Достоверность результатов исследования чувствительности микроорганизмов к АБП зависит от следующих основных параметров:
- состава питательной среды;
- соответствия реальной активности используемых антибиотиков (или их содержания в дисках) паспортным характеристикам (активности);
- соблюдения стандартности выполнения всех лабораторных процедур.
7. Анализ и представление данных по результатам
микробиологического мониторинга
Микробиологический мониторинг
в отделении новорожденных
Для анализа больших объемов информации, собранной при проведении эпидемиологического мониторинга за антибиотикорезистентностью, рекомендуется использовать специальные компьютерные программы, позволяющие создавать в микробиологических лабораториях базы данных, содержащие необходимую информацию, анализировать ее и представлять результаты эпидемиологического мониторинга. Дополнительным преимуществом большинства программ является наличие встроенной экспертной системы, сигнализирующей о выявлении необычных фенотипов резистентности.
Помимо перечисленной выше информации, для проведения анализа и расчета соответствующих показателей могут потребоваться данные медицинской статистики и эпидемиологического наблюдения за факторами риска развития внутрибольничных инфекций, в частности:
Для стационарных лечебных учреждений:
- количество коек по различным отделениям стационара
- число пролеченных больных по различным отделениям
- средняя длительность лечения
- количество микробиологических исследований по отделениям
- количество проведенных оперативных пособий
- количество дней искусственной вентиляции по реанимационным отделениям стационара
- количество дней стояния мочевых и венозных катетеров по отделениям и т.д.
Для лечебных учреждений амбулаторно-поликлинического профиля:
- численность обслуживаемого населения
- число посещений различных специалистов
- количество микробиологических исследований
Перечисленные статистические данные могут использоваться:
- в качестве контроля получаемых результатов микробиологического мониторинга
- для стратификации результатов
- в качестве знаменателя при расчете статистических показателей
НАПРАВЛЕНИЕ
1. Наименование ЛПУ ______________________________________________
2. № истории _____________________________________________________
3. Отделение или домашний
адрес __________________________________
4. Фамилия, И.О. больного
________________________________________
5. Дата рождения _________________________________________________
6. Дата поступления в отделение __________________________________
7. Диагноз _______________________________________________________
8. Операция (+) или (-) Дата операции
____________________________________
9. ИВЛ (+) или (-) Дата
начала ____________________________________
10. Центральный венозный катетер (+) или (-) Дата
постановки ___________________________________
11. Мочевой катетер (+) или (-) Дата
установки ________________________________
12. Дата и время забора
материала ________________________________
13. Антимикробная терапия (какая, когда начата) __________________
14. Вид материала (подчеркнуть): гной, рана, дренаж, в/в катетер,
экссудат., ликвор, плевральная жидкость, желчь, мокрота,
трахеальный аспират, моча,
мазок (указать откуда) _______________________________________
Другой материал (указать) ____________________________________
15. Цель исследования (подчеркнуть):
а) прямая микроскопия материала
б) культуральный метод с идентификацией возбудителя
в) антибиотикограмма
16. При подозрении на дополнительные инфекции
17. Фамилия
врача ________________________________________________________
Тел. _________________________________________________________
ОТВЕТ
1. Дата и время поступления материала ____________________________
2. Фамилия лаборанта, принявшего материал ________________________
3. Вид материала _________________________________________________
4. Прямая микроскопия ____________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
5. Культуральный метод ___________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
6. Антибиотикограмма _____________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
________________________________________________________________
7. Фамилия врача _________________________________________________
8. Дата выдачи результата ________________________________________
9. Примечание: ___________________________________________________
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
по ускоренному определению устойчивости бактерий
к дезинфекционным средствам
Утверждены руководителем департамента ГСЭПН Минздрава РФ
А.А. Монисовым 10 января 2000 г. № 1100-26-0-117
Методические рекомендации разработаны
Испытательным лабораторным центром
Московского городского центра дезинфекции
Авторы: Руководитель ИЛЦ МГЦД д.м.н. профессор Леви М.И.
и д.м.н. профессор Сучков Ю.Г.
1. Общие положения
Настоящие Методические рекомендации предназначены для ускоренного определения устойчивости к дезинфекционным средствам аэробных бактерий. Объектом исследования могут служить любые бактериальные культуры, в том числе с подозрением на приобретение повышенной устойчивости.
Способ основан на применении цветной питательной среды, изменяющей цвет под влиянием жизнедеятельности размножающихся бактерий. Эффективные концентрации дезинфектанта предотвращают накопление бактерий и сохраняют цвет среды.
Ускоренное определение устойчивости бактерий к дезинфекционным средствам возможно как в специализированных медицинских учреждениях, так и в бактерио-логических лабораториях больниц и санэпидслужбы.
2. Ингредиенты и методика анализа
2.1. Дистиллированная вода (рН не ниже 6,0) - применяют для приготовления питательной среды и начальных разведений раствора дезинфекционных препаратов.
2.2. Жидкая цветная питательная среда разработана в качестве универсальной для определения чувствительности к разным дезинфектантам большинства патогенных аэробных бактерий.
Основой служит питательный бульон из панкреатического гидролизата рыбо-костной муки с добавлением 0,5 % глюкозы и 0,002 % индикатора бром-крезолового пурпурного. С помощью раствора 1 %-го NaOH pH цветной питательной среды доводят до 7,6 - 7,7. Среду стерилизуют в автоклаве при 120 град. С в течение 20 мин. Стерильная питательная среда имеет рН 7,2 - 7,4, окрашена в яркий сиреневый цвет. При температуре 4 - 6 град. С среда сохраняется не менее 3-х лет.
Цветная питательная среда способна поддерживать рост единичных клеток эталонных культур бактерий - Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus cereus и других видов аэробных бактерий, ферментирующих глюкозу.
Для более прихотливых бактерий (роды Brucella, Francisella и некоторые другие) следует применять специальные цветные питательные среды.
2.3. Определение устойчивости бактериальных культур к дезинфекционным средствам.
Бактериальную культуру выращивают на питательном агаре 20 - 24 часа при оптимальной для данного вида бактерий температуре. Микробный урожай с поверхности агара снимают шпателем и 0,85 %-ным раствором NaCl. В стерильных пробирках Эппендорфа или в инсулиновых флаконах готовят следующие концентрации бактерий:
7 7 7
1 x 10, 5 x 10 и 10 x 10 мкл в 50 мкл (на каждую концентрацию
берут по 2 - 3 пробирки или флакона). Туда же приливают по 100 мкл
цветной питательной среды, после чего сосуды переносят
в термостат на 4 часа при оптимальной для данного вида бактерий
температуре.
Если за указанное время исходный цвет питательной среды изменится на желтый, то для данной культуры применим описанный в настоящих Методических рекомендациях способ определения устойчивости.
Анализы проводят в стерильных 96-луночных пластмассовых планшетах разового пользования с объемом лунок 200 мкл. Во все лунки вносят по 100 мкл цветной питательной среды. В первые лунки вносят по 100 мкл начального разведения раствора дезинфекционных препаратов на дистиллированной воде, равного удвоенной концентрации, рекомендованной для практики. Поэтому начальным разведением служит та концентрация, которая рекомендована для практического применения, или более низкая, если препарат в обычной концентрации неблагоприятно влияет на окраску цветной питательной среды.
На каждый дезинфекционный препарат отводят горизонтальный ряд лунок, в котором готовят с 2-кратным шагом разведения конкретного препарата в цветной питательной среде. Титрование проводят 8-канальной автоматической пружинной пипеткой со стерильными съемными наконечниками. Число дезинфекционных препаратов, включенных в испытание, соответствует числу горизонтальных рядов планшета. Можно для титрования пользоваться одноканальными пипетками.
Обязательные контроли:
1. 2 лунки с питательной средой (100 мкл), куда вносят 50 мкл
7
испытуемой культуры бактерий (5 x 10 мкл).
2. Цветная питательная среда в объеме 150 мкл, 2 лунки.
3. Первые три разведения каждого дезинфекционного средства на
цветной питательной среде по 150 мкл.
В лунки с разведениями дезинфекционных средств и контрольные
лунки (кроме контроля 2) вносят по 50 мкл взвеси бактерий
7
(5 x 10 мкл). Пластины накрывают крышками и переносят в
термостат с температурой, оптимальной для данного вида бактерий.
Следят за тем, чтобы жидкость в лунках не касалась крышки.
3. Учет результатов анализа
3.1. Некоторые дезинфекционные средства в низких концентрациях могут несколько искажать интенсивность цвета питательной среды. Убедительными изменениями следует считать результаты, если цвет питательной среды приобрел явно желтую или оранжевую окраску.
В случае запаздывания с изменением цвета питательной среды в контроле 1 п. 2.3 (в лунках нет дезинфекционного препарата) учет результатов переносят еще на 2 часа, оставив планшет в термостате, или до следующего дня - при комнатной температуре. В последнем случае появляется возможность кроме изменения цвета учитывать еще один признак - помутнение питательной среды в лунках. Этот дополнительный признак приобретает решающее значение в тех случаях, когда дезинфекционный препарат сам по себе изменяет окраску питательной среды и тем самым затрудняет учет по изменению цвета. Использование мутности для учета результатов невозможно для тех дезинфекционных препаратов, которые при добавлении к цветной питательной среде образуют выраженную опалесценцию.
Возможна регистрация результатов ускоренного определения чувствительности бактериальных культур к дезинфекционным препаратам по изменению цвета питательной среды инструментальным способом. Для этого по окончании экспозиции и учета результатов визуальным способом (необходимо, чтобы в контрольных лунках с культурой среда изменила исходный цвет на желтый) во все лунки планшета добавляют по 50 мкл 1 % раствора фенола. Через 30 минут планшет помещают в аппарат типа Multiscan с фильтром 450 nm и получают в распечатке цифровые интенсивности желтого цвета в лунках.
3.2. Оценка результата анализа.
Бактериальную культуру следует признать устойчивой к действию конкретного дезинфекционного препарата, если в ускоренном способе его концентрация, рекомендованная для практики, не оказывает губительного действия, т.е. в лунках с такой концентрацией средства цвет питательной среды меняется на желтый, а также регистрируется мутность.
Убедительность подобного заключения возрастает, если параллельно в испытания была включена эталонная бактериальная культура того же вида, о которой заранее известно, что она обладает повышенной устойчивостью к данному дезинфекционному препарату и это подтверждается в конкретном испытании.
Результат учета целесообразно оформлять в специальном бланке (таблица 1).
4. Меры предосторожности
Все манипуляции, связанные с определением чувствительности бактерий к дезинфектантам, проводят в специальных лотках (кюветах), которые вместе с содержимым переносят в термостат. По окончании анализа все материалы подлежат обеззараживанию посредством погружения в раствор, например, 6-%-ной перекиси водорода. Многократно промытые водой предметы стерилизуют при 120 град. C в течение 45 мин. в автоклаве. Предметы однократного пользования обеззараживают и утилизируют.
Успех применения ускоренного определения устойчивости бактерий к дезинфекционным средствам в значительной мере зависит от квалификации исполнителей и наличия необходимых ингредиентов. Стандартизация условий проведения анализов ускоренным методом может быть достигнута при наличии специальных наборов, составленных для разным образом оснащенных лабораторий.
Таблица 1
РЕЗУЛЬТАТЫ
определения чувствительности бактериальных культур
к дезинфекционным препаратам
Анализ N
Время начала исследования ________________________________________
Бактериальная культура ___________________________________________
Источник и место выделения культуры ______________________________
Подозреваемая устойчивость культуры
к следующим дезинфекционным препаратам ___________________________
Примечания:
<*> Если кроме цвета учитывали мутность, то результаты приводят в виде дроби.
<**> Культуру относят к разряду чувствительных или устойчивых к конкретному препарату.
Время сообщения о результате анализа _____________________________
(число, время)
Подпись лица, производившего анализ ______________________________
Подпись руководителя бактериологической лаборатории ______________
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Челябинской области
М.Г.МОСКВИЧЕВА
